HSDL2 overexpression promotes rectal cancer progression by regulating cancer cell cycle and promoting cell proliferation / 南方医科大学学报

OBJECTIVE@#To analyze the expression of hydroxysteroid dehydrogenase like 2 (HSDL2) in rectal cancer tissues and the effect of changes in HSDL2 expression level on proliferation of rectal cancer cells.@*METHODS@#Clinical data and tissue samples of 90 patients with rectal cancer admitted to our hospital from January 2020 to June 2022 were collected from the prospective clinical database and biological specimen database. The expression level of HSDL2 in rectal cancer and adjacent tissues was detected by immunohistochemistry, and based on the median level of HSDL2 expression, the patients were divided into high expression group (n=45) and low expression group (n=45) for analysis the correlation between HSDL2 expression level and the clinicopathological parameters. GO and KEGG enrichment analyses were performed to explore the role of HSDL2 in rectal cancer progression. The effects of changes in HSDL2 expression levels on rectal cancer cell proliferation, cell cycle and protein expressions were investigated in SW480 cells with lentivirus-mediated HSDL2 silencing or HSDL2 overexpression using CCK-8 assay, flow cytometry and Western blotting.@*RESULTS@#The expressions of HSDL2 and Ki67 were significantly higher in rectal cancer tissues than in the adjacent tissues (P < 0.05). Spearman correlation analysis showed that the expression of HSDL2 protein was positively correlated with Ki67, CEA and CA19-9 expressions (P < 0.01). The rectal cancer patients with high HSDL2 expressions had significantly higher likelihood of having CEA ≥5 μg/L, CA19-9 ≥37 kU/L, T3-4 stage, and N2-3 stage than those with a low HSDL2 expression (P < 0.05). GO and KEGG analysis showed that HSDL2 was mainly enriched in DNA replication and cell cycle. In SW480 cells, HSDL2 overexpression significantly promoted cell proliferation, increased cell percentage in S phase, and enhanced the expression levels of CDK6 and cyclinD1 (P < 0.05), and HSDL2 silencing produced the opposite effects (P < 0.05).@*CONCLUSION@#The high expression of HSDL2 in rectal cancer participates in malignant progression of the tumor by promoting the proliferation and cell cycle progress of the cancer cells.

Identificação de marcadores moleculares de resposta ao tratamento neoadjuvante em pacientes com adenocarcinoma de reto / Identification of molecular markers of neoadjuvant treatment response in rectal adenocarcinoma patients

Pacientes com câncer de reto (CaRe) em estadio II ou III são tratados com radioquimioterapia neoadjuvante (nCRT), a qual é responsável pela diminuição de recidivas loco-regionais e amputação do esfíncter. A resposta à terapia é variável, incluindo aqueles que não respondem ao tratamento e os que apresentam resposta patológica completa - pCR (15 a 30%). O objetivo deste estudo foi identificar alterações genéticas e epigenéticas que corroborem para a elucidação dos mecanismos de resistência ao tratamento radio e quimioterápico neoadjuvante em pacientes com adenocarcinoma de reto. Foram incluídos 34 CaRe estadio II ou III, submetidos a nCRT. Onze pacientes apresentaram pCR (ypT0N0M0) e 23, resposta patológica incompleta (pIR). Foram utilizadas 10 amostras de reto normal (necrópsias) como referência. As alterações genômicas e de expressão gênica foram avaliadas pelas plataformas CytoScan HD Array e GeneChip Human Transcriptome Array (Affymetrix/Thermo Fisher), respectivamente. O sequenciamento de 105 genes (SureSelectXT Custom Panel, Agilent) relacionados ao câncer foi realizado no NextSeq 550 (Illumina). A plataforma Infinium® Human MethylationEPIC BeadChip (Illumina) foi utilizada para a análise do metiloma. Alterações genômicas identificadas em CaRe evidenciaram alta instabilidade cromossômica e um número significativo de casos com alterações na via de reparo por recombinação homóloga (HR), identificada por mutação em genes da via ou por escores de deficiência (tAI, LST e HDR-LOH). Essas alterações foram corroboradas por vias alteradas relacionadas à regulação das ciclinas e do ciclo celular, assim como do ponto de checagem de reconhecimento de quebras de dupla fita de DNA identificadas por meio do enriquecimento dos genes diferencialmente expressos. A análise integrada dos resultados do metiloma e transcriptômica permitiu a identificação de genes desregulados por metilação os quais foram confirmados com dados externos (TCGA). As diferenças moleculares entre os casos com pCR e pIR incluíram alterações genômica estruturais e um maior index de instabilidade genômica (GII) em pCR. Um maior número de casos com pIR apresentou mutações em genes relacionados à via HR. Esses resultados sugerem que platina e inibidores de PARP1 poderiam ser um tratamento alternativo nos casos com deficiência dessa via. Os perfis de metilação do DNA de cada grupo revelaram maior proporção de sondas hipermetiladas em pCR (44% vs. 18% em pIR). Com base nos dados de três sondas diferencialmente metiladas, foi possível desenvolver um classificador capaz de predizer a resposta à nCRT (100% de sensibilidade e 90% de especificidade). Usando os resultados do transcriptoma, foram identificadas diferentes vias alteradas em CaRe de acordo com a resposta à nCRT. Enquanto os casos com pCR apresentaram vias alteradas relacionadas à resposta do sistema imune e à sinalização de Wnt, o grupo de pIR revelou alterações de controle do ciclo celular e do reparo de quebras de dupla fita de DNA, além de desregulação de mecanismos epigenéticos e de níveis de transcritos. Utilizando os dados de expressão gênica, foi realizada uma análise do secretoma de acordo com a resposta à nCRT, identificando-se ASPH como potencial marcador de pCR. A mesma estratégia revelou UBE2C e CEMIP como marcadores de resistência à nCRT, os quais poderiam ser investigados em biópsias líquidas. Este estudo revelou potenciais marcadores moleculares e mutações que têm potencial para subclassificar os pacientes de acordo com a resposta à terapia atualmente utilizada. Em adição, nossos achados deram evidências de novas estratégias terapêuticas que poderiam ser aplicadas para os pacientes com CaRe

Rectal cancer patients (ReCa) stage II or III undergo neoadjuvant chemoradiotherapy (nCRT), responsible for a decrease in loco-regional recurrence and sphincter amputation. The response to treatment is varied, including patients showing partial or incomplete response to therapy (pIR) and those who achieve pathological complete response - pCR (15 to 30%). The aim of this study was to identify genetic and epigenetic alterations that can be useful to understand the mechanisms of resistance to neoadjuvant chemoradiotherapy in ReCa patients. A total of 34 patients with ReCa stage II or III submitted to nCRT were included. Eleven patients had pCR (ypT0N0M0) and 23 pIR. Ten normal rectal tissue samples (necropsies) were used as reference. Genomic alterations and gene expression profiles were evaluated using the platforms CytoScan HD Array and GeneChip Human Transcriptome Array (Affymetrix/Thermo Fisher), respectively. Targeted nextgeneration sequencing of 105 cancer related genes was performed using the NextSeq 550 (Illumina). The Infinium® Human MethylationEPIC BeadChip (Illumina) platform was used for methylome analysis. High chromosomal instability and a significant number of cases with changes in the DNA damage repair by homologous recombination pathway (HR), identified by mutation in pathway genes or by deficiency scores (tAI, LST and HDR-LOH), were detected in the genomic analysis. These alterations are corroborated by altered pathways related to the regulation of cyclins and the cell cycle, as well as the double-stranded DNA recognition checkpoint identified by the enrichment of the differentially expressed genes. The integrative analysis of differential methylation and transcriptomic results allowed the identification of genes altered by methylation, which were confirmed with external data (TCGA). Molecular differences between pCR and pIR cases included structural genomic changes and a high genomic instability index (GII) in pCR. A higher number of cases with pIR showed mutations in genes related to the HR pathway. These findings suggest that PARP-inhibitors and platinum may be alternative therapeutic approaches for these patients. The DNA methylation profiles of each group revealed a higher proportion of hypermethylated probes in pCR (44% vs. 18% in pIR). Based on data from three differentially methylated probes, a classifier was developed showing the ability of predicting the response to nCRT (100% sensitivity and 90% specificity). Using the transcriptome results, different altered pathways in ReCa were identified according to the response to nCRT. While altered pathways in pCR cases were related to immune system response and Wnt signaling, the pIR group revealed changes in cell cycle control and repair of double stranded DNA breaks, as well as dysregulation of epigenetic mechanisms and transcripts levels. Using the gene expression data, a secretome analysis was performed according to the nCRT response, identifying ASPH as a potential pCR marker. The same strategy revealed UBE2C and CEMIP as markers of nCRT resistance, which could be investigated in liquid biopsies. This study revealed molecular markers and mutations that showed the potential to subclassify the patients according to the response to therapy currently used in the clinical practice. Furthermore, our findings give evidences of novel therapeutic strategies for patients with CaRe

Marcadores e mecanismos de resistência à terapia neoadjuvante e o papel das vesículas extracelulares secretadas pelas células tumorais no câncer de reto / Biomarkers and mechanisms of resistance to neoadjuvnat therapy and the role of extracelular vesicles secreted by tumor cells in rectal cancer

O câncer de reto é o segundo tumor mais comum no intestino grosso correspondendo a um terço do total de casos de câncer colorretal (CCR). Pacientes com câncer de reto em estádios II e III são tratados com radioquimioterapia neoadjuvante seguida de ressecção cirúrgica do tumor. Análises das peças cirúrgicas ressecadas mostraram que apenas 10-45% dos pacientes obtém resposta patológica completa (RCp) à terapia neoadjuvante, estando essa associada com uma diminuição da recorrência local, melhora da sobrevida livre de doença e aumento na preservação esfincteriana. Apesar da melhora na sobrevida nas últimas décadas, a resposta à terapia neoadjuvante continua variável e imprevisível e não é possível identificar e separar clinicamente os grupos de pacientes que terão ou não resposta completa ao tratamento neoadjuvante. Além disso, os mecanismos de resistência à radioquimioterapia nos tumores de reto são pouco compreendidos. Dessa forma, o objetivo principal deste estudo foi identificar marcadores e mecanismos celulares relacionados à resistência à terapia neoadjuvante em adenocarcinoma de reto e o papel das vesículas extracelulares (VEs) nesse processo. O estudo proteômico comparativo entre biópsias obtidas de tumores pré-tratamento com o tumor residual removido cirurgicamente pós-tratamento radioquimioterápico mostrou uma importante alteração no perfil de expressão proteica. Entre as proteínas que aumentam a expressão após a neoadjuvância estão as proteínas de reparo de dano de DNA, Ku70 e Ku80, e a proteína de tráfego intracelular Rab5C. Em um modelo in vitro, foi demonstrado que Rab5C orquestra um mecanismo de resistência à radioterapia nos tumores de reto através da modulação da internalização de EGFR promovida por radiação ionizante (RI). O EGRF intracelular por sua vez é essencial para regular a expressão de Ku70 e Ku80 e a resistência celular à RI. Estes dados apontam Rab5C e EGFR como potenciais alvos terapêuticos para sensibilizar células de câncer de reto resistentes ao tratamento neoadjuvante. Também foi observado que a RI promove alterações epigenéticas predominantemente de hipometilação, e entre os genes alterados estão SPG20 e TBC1D16, sendo o primeiro importante para a internalização de EGFR e o segundo para a regulação de Rab5C e modulação de EGFR. O perfil de expressão proteica foi ainda comparado entre biópsias pré-tratamento de pacientes com RCp e sem resposta patológica, e o resultado mostrou que esses dois grupos de pacientes apresentam um diferente perfil de expressão proteica. Nos pacientes com RCp as proteínas com aumento da expressão estão atuando em vias que favorecem a resposta à terapia, como a detoxificação de glutationa e degradação de glicogênio, enquanto as proteínas com aumento da expressão em pacientes sem RCp estão envolvidas em vias do metabolismo energético do tumor as quais contribuem para a resistência tumoral à terapia. As diferenças observadas nestes grupos devem ser amplamente exploradas uma vez que podem ser marcadores preditivos de resposta ao tratamento radioquimioterápico. A realização de estudos funcionais foi viabilizada pela geração de um modelo celular de tumor de reto resistente à radioterapia. Ao analisar as VEs secretadas por estas células foi observado que a RI não altera a quantidade e o tamanho médio das VEs secretadas, porém é capaz de alterar o carregamento proteico das mesmas. De fato, as VEs de células irradiadas apresentam um perfil proteico diferente quando comparadas as VEs de células não irradiadas, onde encontramos aumento da expressão de Ku70, Ku80 e Rab5C, além das metiltransferases NSUN2 e GLYM nas VEs de células pós RI. Interessantemente, as VEs secretadas por células irradiadas são capazes de transmitir a resistência à RI às células não irradiadas. Além disso os resultados mostraram que o tratamento com VEs de células irradiadas promove metilação em 98% do DNA avaliado em células SW837 em comparação ao tratamento com VEs de células não irradiadas. Os genes hipermetilados estão envolvidos em vias relacionadas ao sistema imune, como a apresentação de antígeno, sinalização de imunodeficiência primária e maturação de células dendríticas. Por fim, foi identificado que a expressão da proteína A33 está relacionada ao grau de diferenciação dos tumores colorretais, e que essa proteína está presente em VEs secretadas por células de adenocarcinoma de reto, indicando que a mesma pode ser usada para isolar VEs específicas do tecido colorretal. Os dados obtidos neste trabalho apontam mecanismos relacionados à resistência à terapia neoadjuvante no adenocarcinoma de reto e que em conjunto permitirão identificar novos alvos terapêuticos com potencial de melhorar a resposta à radioquimioterapia, além de identificar marcadores de resposta à terapia neoadjuvante antes do tratamento e dessa forma, poupar os pacientes não respondedores de terapias tóxicas e melhorar a sustentabilidade na saúde poupando os custos com drogas não eficientes para um grupo de pacientes.

Rectal cancer is the second most common cancer in large intestine, corresponding to one third of total cases of colorectal cancer (CRC). Patients with rectal cancer in stage II and III are treated with neoadjuvant chemoradiation followed by surgical resection. Analyzes of the resected tumor demonstrated that only 10-45% of the patients achieve pathological complete response (pCR) after neoadjuvant therapy, which is associated with a decrease in local recurrence, improvement of disease free survival and increase in sphincter preservation. Despite the improvement in survival in the last decades, the response to neoadjuvant therapy is still variable and unpredictable, and before the surgery it is not possible to identify and separate clinically the group of patients that will or will not have complete response to neoadjuvant treatment. Moreover, the mechanisms of resistance of rectal tumors to chemoradiation are poorly understood. Thus, the main objective of this work was to identify biomarkers and cellular mechanisms related to the resistance to neoadjuvant therapy in rectal adenocarcinomas and the role of extracellular vesicles (EVs) in this process. The comparative proteomic study between biopsy obtained from tumors pretreatment with residual tumor, post chemoradiation treatment, removed by surgery showed an important alteration in the protein expression profile. Among the proteins with increased expression after neoadjuvant therapy are the DNA repair proteins Ku70 and Ku80, and the protein involved in the intracellular trafficking, Rab5C. It was demonstrated in vitro that Rab5C orchestrates a mechanism of radioresistance in rectal tumors by modulating the EGFR internalization promoted by ionizing radiation (IR). The intracellular EGFR is essential to regulate Ku70 and Ku80 expression and the cell resistance to IR. These data pointed Rab5C and EGFR as potential therapeutic targets to sensitize rectal cancer cells resistant to neoadjuvant treatment. It was also observed that IR promotes epigenetic alterations, predominantly hypomethylation, and between the altered genes are SPG20 and TBC1D16, the first is important to EGFR internalization, while the second regulates Rab5C and modulates EGFR. The protein expression profile was further compared between biopsy pretreatment of patients with and without pCR, and the results showed that these two groups of patients present a different protein expression profile. In patients with pCR the proteins with increased expression are involved in pathways favoring the response to therapy, as glutathione-mediated detoxification and glycogen degradation, while the proteins with increased expression in patients without pCR are involved in tumor energetic metabolism pathways that contribute to tumor resistance to therapy. The observed differences in these groups should be widely explored since they may be predictive markers of response to chemoradiation treatment. The performance of functional studies was possible by generation of a cellular model of rectal tumor resistant to radiotherapy. The analysis of the EVs secreted by these cells showed that IR does not alter the amount and the medium size of secreted EVs, but is able to change their protein content. EVs from irradiated cells presented a different protein profile when compared to EVs from non-irradiated cells, where it was found the increased expression of Ku70, Ku80 and Rab5C, besides the methyltransferases NSUN2 and GLYM in EVs after irradiation. Interestingly, the EVs secreted by irradiated cells are capable of transfering resistance to IR to non-irradiated cells. Moreover, the results showed that the treatment of SW837 cells with EVs from irradiated cells promoted methylation in 98% of the analyzed DNA in comparison with the treatment with EVs from non-irradiated cells. The hypermethylated genes are involved in pathways related to immune system, as antigen presentation, primary immunodeficiency signaling and dendritic cells maturation. Lastly, it was identified that the A33 expression is related to the colorectal tumors differentiation degree, and this protein is present in EVs secreted by rectal adenocarcinoma, indicating that it may be used to isolate EVs specific from colorectal tissues. The data obtained in this work pointed to mechanisms related to resistance to neoadjuvant therapy in rectal adenocarcinoma that together will allow to identify new therapeutic targets with the potential to improve the response to chemoradiation, as well as to identify markers of response to neoadjuvant therapy before the treatment, and, in this way, avoid the non-responder patients to receive toxic therapies and improve health sustainability, sparing cost with non-efficient drugs for a group of patients.

Mutación del gen KRAS en el cáncer de colon y recto / KRAS gene mutation in colorectal cancer

Background: KRAS oncogene is involved in colorectal carcinogenesis in 22 to 45% of cases. Aim: To determine the frequency, types and distribution of KRAS mutations in colorectal cancer. Material and Methods: KRAS mutations studies were carried out in primary tumors and metastases of colo-rectal cancer from 56 women aged 60 ± 14 years and 53 men aged 61 ± 11 years. Formalin fixed and paraffin embedded tissue samples were evaluated using RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) and direct sequencing. Results: Primary tumors were located in the colon and rectum in 82 (75.2%) and 24 cases (20%), respectively. In three cases the extraction site of the tumor sample was unknown. In 46 cases (42.2%) KRAS mutations were demonstrated. The main point mutations were located in codon 12 (80.4%), G12D (39.1%), G12V (24.2%), G12S (6.5%), G12A (4.3%); G12C (4.3%), G12R (2.1%) and 19.6% at codon 13 (G13D). No differences were demonstrated in the frequency and distribution of mutations by gender, age, primary versus metastatic tumors or tumor location. Conclusions: In this series, 42% of colorectal cancer tissue samples had KRAS mutations. Their frequency and distribution are similar to those reported in the literature, except for G12C mutation.

Instabilidade de microssatélite - MSI nos marcadores (BAT26, BAT25, D2s123, D5S346, D17S250) no câncer de reto / Microsatellite instability - MSI markers (BAT26, BAT25, D2S123, D5S346, D17S250) in rectal cancer

RACIONAL: O câncer colorretal tem importante componente genético. Os microssatélites são considerados marcadores fenotípicos de prognóstico, resposta terapêutica e de identificação de pacientes com mutação nos genes de reparo do DNA. OBJETIVOS: Avaliar o perfil molecular dos tumores submetidos à microcirurgia endoscópica transanal (TEM) para tratamento do câncer de reto. MÉTODO: Foram selecionados 38 espécimes avaliados segundo o estadiamento patológico. Foram escolhidas amostras da região tumoral e realizada dissecação e extração do DNA. Os tumores colorretais foram testados para instabilidade de microssatélite - MSI utilizando um painel composto de cinco marcadores (BAT25, BAT26, D2S123, D5S346 e D17S2720), técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). RESULTADOS: Nos 38 casos observou-se que 63% eram do sexo masculino e 47% feminino com média de idade de 58,4 anos. Em relação ao tipo tumoral 58% eram adenomas, sendo 24% adenomas de baixo grau e 76% de alto grau; 42% eram carcinomas. Quanto à profundidade de ressecção, verificou-se que 80% dos casos incluíam a gordura perirretal e 20% até a muscular própria. O microssatélite com maior frequência de amplificação foi o BAT26 (100%) e o menor D17S2720 (85,4%). Dezesseis casos (42%) apresentaram MSI; eram dez carcinomas, dois adenomas de baixo grau e quatro de alto grau. Vinte e dois casos (68%) tinham microssatélite estáveis - MSS. A perda alélica dos marcadores de microssatélites foi estatisticamente significante nos casos de carcinoma em relação a adenomas. O microssatélite com maior frequência de amplificação foi o BAT26 (100%) e o menor D17S2720 (85,4%); 16 casos (42%) apresentaram instabilidade de microssatélite - MSI. Desses, dez eram carcinomas, dois adenomas de baixo grau e quatro de alto grau; 22 casos (58%) apresentaram microssatélite estáveis - MSS. CONCLUSÃO: A instabilidade de microssatélite (MSI-H) foi significantemente associada com carcinomas retais, confirmando sua utilização como marcador prognóstico na carcinogênese retal.

BACKGROUND: Colorectal cancer has an important genetic component. Microsatellites are considered phenotypic markers of prognosis, therapeutic response and identify patients with mutations in DNA repair genes. AIM: To evaluate the molecular profile of tumors underwent to transanal endoscopic microsurgery - TEM in surgical treatment of rectal cancer. METHOD: Thirty eight surgical specimens were evaluated according to pathological staging and the region of the tumor were dissected and submitted to DNA extraction. The colorectal tumors were tested for microsatellite instability - MSI using a panel of five markers (BAT25, BAT26, D2S123, D5S346, and D17S2720) technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). RESULT: From total 63% were male and 47% female, with mean age of 58.4 years. In relation to tumor type adenomas were 58%, 24% low-grade adenomas and 76% high grade; 42% were carcinomas. The depth of resection 80% included the rectal perirenal fat and 20% the muscularis propria. The most frequent microsatellite amplification was BAT26 (100%) and lowest D17S2720 (85.4%). Sixteen patients (42%) were MSI, ten were carcinomas, two low grade adenomas and four high grade. Twenty-two cases (68%) showed microsatellite stable - MSS. The allelic loss of microsatellite markers was statistically significant in cases of carcinoma in relation to adenomas. The most frequent microsatellite amplification was BAT26 (100%) and lower D17S2720 (85.4%), 16 patients (42%) had microsatellite instability - MSI thereof ten were carcinomas, two low grade adenomas, four high-grade adenomas and 22 cases (58%) were microsatellite stable - MSS. CONCLUSION: Microsatellite instability (MSI-H) was significantly associated with rectal carcinomas, confirming its use as a prognostic marker in colorectal carcinogenesis.

Determinação da expressão da ciclina G no câncer do reto / Determination of cyclin G expression in rectal cancer

Introdução: A identificação de mecanismos genéticos envolvidos no processo de carcinogênese do câncer colorretal levou ao surgimento de novas estratégias terapêuticas como a terapia gênica. Através do bloqueio ou estímulo de determinados alvos genéticos ou moleculares seria possível interromper o ciclo celular de células transformadas. Uma das estratégias sugeridas foi a utilização de sequências anti-sense do gene da ciclina G que revelou resultados iniciais clínicos e experimentais promissores em diversas neoplasias, inclusive na colorretal. Assim seria esperado que a expressão da ciclina G estivesse freqüentemente alterada de maneira seletiva nas células do câncer colorretal quando comparado às células normais. Por estas razões, decidiu-se estudar a expressão da ciclina G em pacientes com câncer do reto. Métodos: Dados clínicos, epidemiológicos, anátomo-patológicos e de sobrevivência de 36 pacientes com câncer do reto foram obtidos e correlacionados com os resultados de expressão imunohistoquímica da ciclina G. O tecido neoplásico e normal distante da lesão primária foram submetidos a reação imunohistoquímica com anticorpo monoclonal anti-ciclina G e quantificados através de três métodos: (1) quantitativo, obtido a partir da contagem de células determinando a razão entre o número de células positivas e o número total de células contadas em 10 campos; (2) semi-quantitativo (cruzes), obtido a partir da pontuação em sistema de cruzes conforme a intensidade e quantidade de células positivas em áreas de maior impregnação do corante; (3) semi-quantitativo (escore), obtido a partir da pontuação em sistema de escore (alto ou baixo) conforme a intensidade e quantidade de células positivas em áreas de maior impregnação do corante. O estudo estatístico incluiu teste T de student, Qui-quadrado, exato de Fisher, teste t pareado, Wilcoxon, log-rank e curva ROC sendo considerados significativos quando o valor de p<0,05. Resultados: A expressão da ciclina G foi positiva...

Introduction: Identification of genetic mechanisms involved in colorectal cancer carcinogenesis led to the development of new treatment strategies such as gene therapy. The aim of this strategy is to interrupt cell-cycle of transformed malignant cells by blocking or stimulating specific gene expression. Utilization of cyclin G antisense constructs has been suggested with clinical and experimental promising results in various neoplasias, including colorectal cancer. In this setting, one would expect that cyclin G would be selectively overexpressed in colorectal cancer cells as opposed to normal tissue. For this reason, we decided to study cyclin G expression in patients with rectal cancer. Methods: Clinical, epidemiological, pathological and survival data from 36 patients with rectal cancer was collected and correlated with Cyclin G immunohistochemical expression. Neoplastic and non-adjacent normal tissue were stained with monoclonal anti-Cyclin G antibody and quantified according to 3 different methods: (1) quantitative, obtained from cell count and determined by the ratio between positive counted cells and total number of counted cells observed in 10 microscopic fields; (2) semi-quantitative (crosses), obtained from a scoring system that takes into account both quantity and intensity of most strongly stained areas; (3) semi-quantitative (score), obtained from a scoring system that takes into account both quantity and intensity of most strongly stained areas. Statistical analysis included ROC curves, student's T, Chi-square, Fisher's exact, log rank, Wilcoxon, and paired t test. Significant differences were considered for p<0.05. Results: In tumor-tissue, positive Cyclin G expression was observed in 76.5±30% of counted cells, with a mean number of 3.2±1.1 crosses and high expression score in 32 patients (89%). In normal tissue, positive cyclin G expression was observed in 42.2±27.4% of counted cells, with a mean of 1.9±1.1 crossed and high expression score...

Tumores digestivos simultáneos / Simultaneous digestive tumors

Synchronous and metachronous gastrointestinal tumors are well know entities, describing malignant tumors placed in the same organ, at the time of initial diagnosis or during the follow-up control. I would like to present two cases of malignant tumors placed in different organs of the digestive tube, at the time of diagnosis, coining the name simultaneous for these entities, stating laboratory finding and signo-symptomatologic interpretation difficulties, and proposing endoscopic approach as a valid diagnostic method.

Evaluación de la proteína p53 como marcador pronóstico en cáncer colorrectal / Evaluation of p53 protein that prognostic method in colorectal cancer

La expresión de la proteína p53 fue estudiada por método inmunohistoquímico en 28 pacientes con cáncer colónico o rectal utilizando los anticuerpos monoclonales específicos DAKO - p53 - DO - 7.La positividad de la proteína p53 fue encontrada en 22 de 28 piezas de resección (78,57 por ciento). Se relacionaron las diferentes variables evaluadas, edad, sexo, localización, tamaño del tumor, forma de crecimiento, grado de diferenciación, componenete mucinoso, grado nuclear, índice mitótico, expresi162n proliferativa a través de la determinación del antígeno KI 67-AMAC, grado de Dukes, infiltración neoplásica vascular hem160tica, linfática y perineural, infiltración linfocitaria y ganglios metastásicos, con la positividad de la proteína p53. Las cifras de sobrevidas se obtuvieron de un seguimiento de hasta 15 meses y la expresión de proteína p53 se asoció a un pobre pronóstico de la enfermedad. Los resultados indican que la determinación de la proteína p53 podría ser utilizada como marcador pronóstico en cáncer colorrectal, aunque su significación es aún materia de debate

Oncogen C-erb B2: su expresión en un estudio inmuno-histoquímico de enfermedad de Paget extramamaria / C-erb B2 oncogene: its expression in Paget's extramammary disease

Presentamos el caso de una paciente de 69 años, de sexo femenino, con enfermedad de Paget extramamaria variante parianal, de 8 años de evolución, asociada a adenocarcinoma rectal subyacente, a quien se le realizan estudios histopatológicos convencionales, histoquímica e inmunohistoquímica, incluyendo en los mismos el anticuerpo monoclonal para el oncogen C-erb B2. Se destacan los aspectos salientes del mismo y se evalúa su utilización en esta entidad.

DNA ploidy with relation to histology in tumours of breast and rectum.

Biopsy materials from breast and rectal tumour cases were studied for cytophotometric analysis of DNA ploidy levels. Aneuploid DNA patterns were observed in majority cases of late stage and poorly differentiated carcinomas. Increased aneuploidy was also observed in metastatic growths and post menopausal cases of breast cancers.

Hábito de fumar, alcoholismo y herencia en el cáncer colorrectal / Smoking habit, alcoholism and inheritance in the colorectal cancer

Se estudian 23 casos de cáncer de colon y rectosigmoides, clasificados según la Clasificación Internacional de Enfermedades (CIE-ICD) con los números 153 y 154. Se encuentra mayor número de mujeres entre los pacientes (78,2%). Se indica que en la localización anatómica del intestino grueso para los tumores del ángulo hepático no hay incidencia de alcoholismo o tabaquismo en esta serie. Se propone la historia familiar de cáncer entre los pacientes fumadores, que pueden sinérgicamente resultar cofactores en la patogenia de la enfermedad. Se trata de un estudio epidemiológico retrospectivo lineal. Se aborda la literatura sobre el tema